马耳他骑士团在马耳他之围中成功抵御奥斯曼帝国入侵的关键在于几个方面：
领导与组织：让·德·瓦莱特（后来的马耳他大团长）的领导和组织能力至关重要。他提前做好了准备，命令所有骑士团修会作好准备，一旦发出召集令，便要返回马耳他[1]。这种迅速的动员和组织能力为后续的防御战打下了基础。
战略防御：马耳他骑士团利用了岛上的地形和堡垒进行防守。他们依托圣艾尔摩堡、圣安杰洛堡和比尔古等坚固的要塞进行抵抗，这些要塞在设计上就是为了抵御海上攻击[2]。
士气与决心：骑士团成员、马耳他平民和步兵共同展现出了极高的士气和决心，他们共同取得了这场围城战的胜利[3]。这种团结一致的抵抗精神是他们能够抵御奥斯曼帝国攻击的重要因素。
外部援助：尽管奥斯曼帝国没有立即追击入侵马耳他，但西班牙等基督教国家提供了宝贵的援助，这对于马耳他骑士团能够持续抵抗起到了关键作用[1]。
奥斯曼帝国的战术失误：奥斯曼帝国未能有效利用其海军优势，且在战术上存在失误，未能迅速攻破马耳他的防御，这给了骑士团更多的时间来加强防御和组织反击[4]。
综上所述，马耳他骑士团之所以能在马耳他之围中成功抵御奥斯曼帝国的入侵，是由于他们出色的领导、战略防御、高昂的士气、外部援助以及奥斯曼帝国的战术失误共同作用的结果。这场胜利打破了欧洲人心中奥斯曼帝国不败的神话，并标志着西班牙在地中海地区的影响力[3]。